实时定量pcr仪是在从PCR基础上发展起来的，功能强大的多的一种在DNA扩增的同时可以实时检测核酸产物的方法。它用荧光化学物质对PCR进程进行实时检测，得到每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过与同时被测量的参考DNA浓度的比较，定量计算出待测基因的浓度。

　　从仪器的技术含量角度看，qPCR仪，即实时荧光定量PCR仪技术及制造难度比PCR仪高的多，仪器的价值同样也高得多。

　　实时定量pcr仪所使用的荧光物质可分为两类：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：

　　1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的心仪技术平台。

　　2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过熔解曲线，确定PCR反应是否特异。

　　3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光  。